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环境检测

- 编辑:本地生活网 -

环境检测

  1.1 蜂胶提取物取本地产蜂胶,冰冻粉碎后以95%乙醇浸泡72 h,过滤,滤液于40℃减压挥干溶剂,二甲基亚砜(DMSO)溶解定容为2 mg/ml。

  2.2 流式细胞仪检测收集对照组和80 μg/ml蜂胶作用不同时间(24,48,72 h)的细胞,用PBS洗涤2遍,经柠檬酸缓冲液固定1 h以上,上机前加1 800 μl胰酶消化液充分作用,加入1 500 μl碘化丙啶(PI)作用15 min以上,过滤,上机进行细胞凋亡分析和细胞周期分析。环境检测

  2.3 原位末端标记法(TUNEL)定量检测分别于各剂量药物作用后24,48,72 h收集细胞,PBS洗2次,细胞涂片,室温干燥。按原位细胞凋亡检测试剂盒说明进行操作,用普通光镜计算凋亡率(AI)。计算方法:随机选取5个高倍视野,分别计阳性细胞数及总细胞数,代入下式:AI=阳性细胞数/总细胞数×100%。

  2.4 Hep-2细胞内Ca2+变化的激光共聚焦显微镜检测对数生长期Hep-2细胞,用D-Hanks液洗涤2次,于37℃避光条件下Fluo-3/AM(10 μmol/L)荷载。40 min后用D-Hanks液洗涤细胞3次,洗去细胞外残余染料,环境检测最后保留少许细胞外D-Hanks缓冲液,平衡10 min。环境检测经不同浓度蜂胶作用不同时间,在激光共聚焦显微镜下扫描细胞内荧光强度,激发波长488 nm,发射波长526 nm,以本底荧光强度为参照(0),检测细胞内Ca2+荧光强度。

  2.5 数据统计学处理采用SPSS10.0统计软件进行统计处理,计量资料用±s表示,比较时采用t检验。α=0.050。

  3.2 TUNEL标记各组细胞凋亡率明显升高,与同时间对照组比较差异有显着性,且呈现一定的时间、剂量依赖性。与对照组比较,*P<0.05,**P<0.01,各时间组、各剂量组相关系数r经检验,P<0.013.3 Hep-2细胞内Ca2+的变化结果见表2。随药物浓度的增加,不同浓度组之间的细胞内Ca2+荧光强度亦增高。P<0.05。

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